فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word دارای ۵۰ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word :

این مقاله با فرمت Word بوده و قابل ویرایش است همچنین آماده پرینت می باشد

موضوع : فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word

اولین مرحله در فرایند تخلیص پروتئینها هموژنیزاسیون بافت مورد نظر ‌ جهت تهیه عصاره می باشد تهیه عصاره از یک منبع طبیعی همچون قارچ خوراکی با روشهای مختلفی قابل انجام است همانگونه که در شکل پیوست نشان داده شده است خرد کردن سلولها به دو روش عمده صورت می گیرد روش مکانیکی روش غیر مکانیکی در روش مکانیکی عمل خرد نمودن سلولها در دو حالت مایع و یا جامد انجام میشود در روش مایع استخراج پروتئینها از بافت مورد نظر در محیط مایعی همچون محلول بافر صورت می گیرد بدین منظور بافت به همراه بافر در مخزن دستگاه هموژنایزر ریخته شده و با ایجاد نیروی مکانیکی در مخزن سلولها خرد می شوند و به همراه محلول بافر مخلوط همگنی را تشکیل می دهند بدین ترتیب محتویات داخل سلولها از جمله پروتئینها به داخل بافر آزاد می گردند از آنجائیکه پروتئینها ‌مولکولهای کم و بیش محلول در آب هستند بخشهای نامحلول و قطعات خرد نشده و سخت سلولی را می توان با کمک ته نشین سازی با روش سانتریفوگاسیون از بخش محلول جدا نمود

ممانعت از فعالیت پروتئازهای سلولی با استفاده از محلول PMSF یکی از مسائل مهم در فرآیند تخلیص پروتئینها از بافتهای زنده حفظ پایداری پروتئین هدف است و مهمترین عاملی که بر ساختار پروتئینهای موجود در عصاره آسیب وارد می کند شکست پروتئولیتیک توسط پروتئازهای سلولی می باشد پروتئازها دسته ای از آنزیمها هستند که فعالیت پروتئازی خود را بر روی سایر آنزیمها و پروتئینها انجام می دهند از این رو در مرحله تهیه عصاره ‌لازم است تا با استفاده از یک ترکیب ممانعت کننده فعالیت پروتئازها ‌همچون PMSF از این خطر جلوگیری بعمل آید PMSF مهار کننده تمامی سرین پروتئاز ها است و با غلظت مؤثر mM11/0 و نیمه عمر یک ساعت قادر است سرین پروتئازها را بطور برگشت ناپذیر و سیستئین پروتئازها را با احیای گروه تیول آنها بطور برگشت پذیر مهار نماید سانتریفوگاسیون یکی از روشهای متداول مورد استفاده در آزمایشات استخراج و تلخیص پروتئینها روش سانتریفوگاسیون می باشد این روش بطور کلی به منظور اهداف زیر بکار می رود

بازیافت رسوبها

جداسازی دو فاز مایع غیر قابل اختلاط

بخش بندی اجزاء سلولی همچون اسیدهای نوکلئیک و پروتئینها

در این روش ذرات مختلف موجود در محلول تحت تأثیر نیروی میدان سانتریفوگال با سرعتهای متفاوتی ته نشین می شوند بطوریکه سرعت ته نشین سازی وابسته به عواملی چون اندازه شکل بار ‌چگالی ذره در مقایسه با محیط سانتریفوگاسیون ناروانی محیط و دما است در مرحله جداسازی مقدماتی فرایند تخلیص صاف کردن هموژن سلولی در مقادیر آزمایشگاهی و بازیافت رسوب محولها با استفاده از دستگاههای سانتریفوژ یخچالدار با دورهای متوسط تا بالا صورت می گیرد سانتریفوژهای با دور بالا می توانند سرعتهای rpm750002000 یا g× ۵۰۰۰۰۰g×۴۰۰۰۰ را تأمین نمایند نیروی لازم جهت ته نشین سازی اجزاء مخلوطها ‌با استفاده از دو کمیت rpm و gRCF تعیین می شود بطوریکه رابطه بین این دو کمیت به قرار زیر است

روش تهیه عصاره مقدار ۲۵۰ گرم قارچ منجمد شده در دمای ۲۰ درجه سانتیگراد توسط رنده برقی دوبار رنده شد تا خمیر نرمی بدست آمد این خمیر به یک بشر یک لیتری منتقل گردید و با ml250 بافر A و ۱۰۰ میکرولیتر محلول F PMS به مدت ۳۰ دقیقه در درون ظرف یخ خشک در دمای صفر درجه سانتیگراد به آرامی با همزن مغناطیسی مخلوط شد پس از این مدت ‌مخلوط حاصل به سه ظرف مخصوص سانتریفوژ یخچالدار منتقل شد و با دور rpm14000 به مدت ۳۰ دقیقه در دمای c سانتریفوژ شد مادر آب حاصل یا عصاره پروتئنی که شامل پروتئینهای محلول در بافر می باشد در یک بشر یک لیتری خالی شد و رسوب بدست آمده دور ریخته شد

رسوبدهی پروتئینها حلالیت و پایداری پروتئینها در محلولهای آبی بسیار با اهمیت است و از ملزومات استخراج پروتئینها از منبع زنده به شمار می آیند مناسبترین میانکنش بین پروتئین با دیگر مولکولها ‌یونها و حلالهای آبی از طریق گروههای آبدوست سطح پروتئین تأمین میشود پروتئینها براساس ترکیب آمینواسیدهای تشکیل دهنده کمترین حلالیت در آب را در نقطه ایزوالکتریک PI خود دارند رسوب پروتئین های موجود در عصاره آبی با استفاده از عواملی چون ‌افزودن نمکها حلالهای آلی یا پلیمرهای آلی ‌تغییر pH و دمای محلول امکان پذیر است در طی عمل رسوبدهی پروتئنها به منظور جلوگیری از غیر طبیعی شدن پروتئینها استفاده از دماهای پائین بین ۴۰ درجه سانتیگراد ضروری می باشد علاوه بر این هنگامی که رسوبدهی پروتئینها با استفاده از حلالهای آلی همچون اتانل یا استن انجام می شود‌بعلت کاهش یافتن نقطه‌انجماد محلول دماهای زیر صفر درجه سانتیگراد نیز می تواند بکار رود اما استفاده از این حلالها خطر غیر طبیعی شدن پروتئینهای عصاره را بالا می برد پلیمرهای ارگانیک همچون پلی اتیلن گلایکول PEG همانند حلالهای آلی بواسطه جانشینی به جای مولکولهای آب موجب کاهش در حلالیت پروتئینها می گردند امتیاز PEG نسبت به حلالهای آلی کنترل ساده تر و ارزان بودن آن است ولی برداشت آن از محلول پروتئینی مشکل می باشد

تغییر pH بعنوان یک روش ساده و ارزان برای رسوبدهی پروتئینها بکار می رود بطوریکه در نقطه pH=pI پروتئینها بسادگی از یک محلول آبی رسوب می نمایند این روش وابسته به قدرت یونی است به نحوی که اتصال یونها به پروتئینها نقطه ایزوالکتریک آنها را تغییر می دهد بعلاوه در محلولهای نمکی با ثابت نگهداشتن غلظت نمک می توان با تغییر دمای محلول پروتئینها را رسوب داد در محلولهای آبی پروتئینها همچون مولکولهای دیگر با پیوندهای کم و بیش قوی مولکولهای آب در یک ساختار منظم احاطه می شوند آب بدلیل ثابت دی الکتریک بالا ‌یک حلال عمومی برای پروتئینها محسوب می شود و چنین کمیتی با افزودن یونهایی همچون غلظتهای پائین Nacl به آب افزایش می یابد شکل ۳ از این رو غلظت و نوع یونها بواسطه تغییر در ساختار و خواص آب ‌ بر روی حلالیت پروتئینها تأثیر می گذارد این اثرات اغلب با مراجعه به یونهای Lyotrop Series Hofmeister Series توضیح داده میشود

اولین یونهای هر سری ساختار آب را می گسلد و حلالیت پروتئینها را کاهش می دهد Salting out effect ولی یونهای آخر معمولاً حلالیت مولکولهای غیر قطبی را افزایش می دهند Salting in effect این بدان معنی است که نمکهای مختلف با اثر ترکیبی آنیونها و کاتیونهای این سری بر روی حلالیت پروتئینها اثر می گذارند جزء بندی پروتئینها با نمک آمونیوم سولفات عصاره خام حاصل از مرحله استخراج پروتئین ها به منظور کاربرد مستقیم بر روی ستونهای کروماتوگرافی مناسب نیست بنابراین روشی لازم است تا علاوه بر آنکه عصاره را تغلیظ کند بیشترین حجم پروتئینها را نیز برداشت نماید نمک آمونیوم سولفات معمولترین نمک بکار رفته جهت رسوبدهی جزئی پروتئینها می باشد این نمک با افزایش اثر آب گریزی در محلول موجب تجمع پروتئینها از طریق سطوح هیدروفوبیک و در نتیجه رسوب آنها می گردد در این روش ابتدا پروتئینهای حجیم با یکدیگر رسوب می کنند و به این ترتیب بخشی از پروتئینهای اضافی حذف می شوند سپس در مرحله بعد رسوبگیری پروتئین مورد نظر می تواند از مادر آب بدست آمده رسوبگیری شود

غلظت نمک آمونیوم سولفات مورد نیاز برای رسوبدهی بصورت درصد اشباع بیان میشود که وابسته به دماست منحنی تیپیک رسوبدهی پروتئینها با آمونیوم سولفات را نشان می دهد به ترتیبی که با هر مرحله افزایش غلظت نمک مقدار پروتئین رسوب داده شده تغییر می نماید مزیت استفاده از نمک آمونیوم سولفات بعنوان یک عامل رسوبدهنده در این است که خطر غیر طبیعی شدن پروتئینها پائین بوده و پس از رسوبگیری رسوب به سهولت در محلولهای آبی قابل حل می باشد اما محلول پروتئینی حاصل ‌نیاز به دیالیز شدن دارد تا قدرت یونی مناسب برای کاربرد در کروماتوگرافی تعویض یون را پیدا نماید روش رسوبدهی جزئی پروتئینها رسوبدهی پروتئینهای موجود در عصاره قارچ در دو مرحله ۳۵% و ۷۵% اشباع نسبت به نمک آمونیوم سولفات انجام شد که مراحل آن بشرح ذیل است مرحله اول اشباع ۳۵ درصد آمونیوم سولفات با توجه به جدول رسوبدهی پروتئینها با نمک آمونیوم سولفات جدول پیوست در دمای صفر درجه سانتیگراد به ازای هر یک میلی لیتر از عصاره g 197/0 نمک آمونیوم سولفات وزن شده و به تدریج به عصاره پروتئینی اضافه گردید

ساخت محلولهای مختلف

فایل ورد کامل مقاله ساخت محلولهای مختلف ۵۰ صفحه در word
فهرست مطالب

ساخت محلولها

محلولهای بافری

محلولهای االکتروفورز

محلولهای رنگامیزی ژل پلی آکریل آمید

معرف برادفورد

آماده سازیها

روشها

تهیه عصاره از قارچ

اثرات نمک بر روی حلالیت پروتئین ها

اندازه گیری مقدار پروتئین

الکتروفورز در ژل پلی آکریل آمید PAGE