پاورپوینت کامل کشت سلول و بافت گیاهی ۳۴ اسلاید در PowerPoint

توجه : این فایل به صورت فایل power point (پاور پوینت) ارائه میگردد

 پاورپوینت کامل کشت سلول و بافت گیاهی ۳۴ اسلاید در PowerPoint دارای ۳۴ اسلاید می باشد و دارای تنظیمات کامل در PowerPoint می باشد و آماده ارائه یا چاپ است

شما با استفاده ازاین پاورپوینت میتوانید یک ارائه بسیارعالی و با شکوهی داشته باشید و همه حاضرین با اشتیاق به مطالب شما گوش خواهند داد.

لطفا نگران مطالب داخل پاورپوینت نباشید، مطالب داخل اسلاید ها بسیار ساده و قابل درک برای شما می باشد، ما عالی بودن این فایل رو تضمین می کنیم.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل می باشد و در فایل اصلی پاورپوینت کامل کشت سلول و بافت گیاهی ۳۴ اسلاید در PowerPoint،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از مطالب داخلی اسلاید ها

پاورپوینت کامل کشت سلول و بافت گیاهی ۳۴ اسلاید در PowerPoint

اسلاید ۳: وقتی درباره کشت گیاه صحبت می شود معمولاً منظور کشت گیاهان در گلدان، زیرپلاستیک، گلخانه و یا مزرعه می باشد.تکثیر رویشی که شامل قلمه زدن، خوابانیدن و پیوند زدن می باشد از دیرباز در کشاورزی اهمیت داشته واز آن در تکثیر گیاهان زراعی، درختان میوه و … استفاده می شود. البته روشهای تکثیر رویشی در شرایط طبیعی در برخی موارد کارآمد نبوده و روش جدیدی از کشت گیاهان، تحت عنوان کشت سلول و بافت گیاهی معرفی و ارائه شده است.کشت سلول و بافت گیاهی که با عنوان کشت درون شیشه( invitro) و یا کشت استریل نیز مطرح می شود و در مورد تمام انواع کشت های استریل که در شرایط درون شیشه ای انجام می گیرد ، به کار می رود.در حال حاضر تکنیکهای کشت بافت به عنوان ابزاری قوی جهت مطالعه مشکلات اساسی و کاربردی بیولوژی گیاهی در آمده است. علاوه برآن در سالهای اخیر این تکنیک ها کاربردهای تجاری گسترده ای درتکثیر گیاهان مختلف از جمله گیاهان زینتی و دارویی و نیز حذف عوامل بیماریزا از گیاهان پیدا نموده است.مقدمه۱

اسلاید ۴: مقدمهبیوتکنولوژی سلولی و مهندسی ژنتیک زمینه‎های اصلی بیوتکنولوژی نوین را تعیین کرده و شامل روش‏هایی می‎باشند که در قرن بیستم به‎طور وسیع توسعه یافته و در بسیاری از کشورها مورد استفاده قرار گرفته‎اند.بیوتکنولوژیعلمی مشتمل بر روش‏ها و تکنیک‏های تولید، ذخیره‏سازی و فرایندهای کشاورزی و همچنین محصولات دیگری که مواد زیستی معمولی و غیرتراریخته گیاهان، حیوانات و ریزسازواره‎ها را در شرایط طبیعی و مصنوعی به کار می‎برند۲

اسلاید ۵: مقدمهبیوتکنولوژی سلولی بر ویژگی خاص سلول از قبیل خاصیت توتی‎پوتنسی سلول، توانایی باززایی یک موجود کامل از آن و همچنین قابلیت سنتز متابولیت‏های ثانویه باارزش از این سلول‏ها بنیان نهاده شده است و از این طریق:توسعه سریع فرم‏ها و لاین‏های باارزش محصولات جدید را از طریق اصلاح به منظور ایجاد مقاومت به تنش‏های زنده و غیرزندهافرایش تولید و کیفیت محصولات کشاورزیریزازدیادی ژنوتیپ‏های باارزشعاری‏سازی گیاهان از ویروس‏ها و ویروئیدهادستیابی به مواد فعال بیولوژیکی جهت اهداف پزشکی و تغذیه‏ای۳

اسلاید ۶: کشت بافتکشت بافت چیست؟کشت بافت یکی از روش های مهندسی ژنتیک است که از راه آن یک سلول یا بافت از یکی از اندام های گیاهی را درون بستر مناسب و محیط کشت قرار می دهند تا در اثر تغذیه و رشد آن یک گیاه کامل حاصل آید.بافت در واقع مجموعه‌ ای از سلول‌ های اندام‌ های گیاهی را تشکیل می‌ دهد و البته به‌ طور کلی این کلمه برای همه موجودات زنده مورد استفاده قرار می‌ گیرد . بافتی که برای کشت انتخاب می‌ شود باید از هر گونه بیماری سالم باشد و در واقع بخشی باشد که لیاقت کامل شدن و تبدیل شدن به گیاه کامل را داشته باشد.۴

اسلاید ۷: کشت بافتچرا کشت بافت؟یکی از کاربردهای مهمی که باعث می‌ شود تکنیک کشت بافت مورد استفاده قرار گیرد ، تکثیر و ازدیاد گونه‌ های مقاوم و مفید هستند . جذابیتی که این روش از تکثیر دارد تبدیل یک گیاه کامل از بافتی کوچک است . بستر کشت در این روش محیطی سرشار از مواد غذایی است تا بتواند بافت مورد نظر را تا زمانی که بتواند گلیم خود را از آب بیرون بکشد ، تغذیه کند.فضای مورد استفاده برای کشت بافت ، محیطی بسته و راکد است و به‌ طور معمول از محفظه شیشه‌ ای یا پلاستیکی شفاف تشکیل می‌ شود تا بتواند نور را نیز تا اندازه مورد نیاز دریافت کند۵

اسلاید ۸: کشت بافتمزایای کشت بافت گیاهان :از مزایای کشت بافت تولید انبوه و سریع یک رقم مطلوب و یا رقم های جدید است . در گیاهان بذرهای تولید شده کاملا همانند گیاه مادر خود نیستند . همچنین این بذور با یکدیگر نیز تفاوت دارند . پس چنانچه یک گیاه مطلوب در منطقه ای توسط کشاورزان برگزیده شود و از آن بذر تهیه نمایند ، تضمینی وجود ندارد که بذور سبز شده ویژگی های مورد نظر را داشته باشند . همچنین از راه های معمول مانند قلمه زدن نیز نمی توان بسیاری از گیاهان را تکثیر کرد . اما با استفاده از روش های کشت بافت می توان در زمان کوتاه تعداد زیادی از یک گیاه مطلوب را تهیه نمود.*از مزایای کشت بافت تولید انبوه و سریع یک رقم مطلوب و یا رقم های جدید است . با استفاده از کشت بافت میتوان با روش هایی آلودگی ها بویژه ویروس را حذف نمود و از آن پس تمام گیاهان تولید شده عاری از آلودگی هستند.۶

اسلاید ۹: اولین بار در سال ۱۸۳۸ اشلیدن و شوان تئوری را ارائه نمودند. براساس این تئوری ، هر یک از سلولهای یک موجود پرسلولی اگر در شرایط مطلوب محیطی قرار بگیرند توانائی تکامل و تبدیل شدنبه یک موجود کامل را دارند. بعدها این تئوری به عنوان اساس مطالعات در زمینه کشت بافت قرار گرفتتاریخچهاولین بار در سال ۱۸۳۸ اشلیدن و شوان تئوری Totipotency را ارائه نمودند. براساس این تئوری ، هر یک از سلولهای یک موجود پرسلولی اگر در شرایط مطلوب محیطی قرار بگیرند توانائی تکامل و تبدیل شدنبه یک موجود کامل را دارند. بعدها این تئوری به عنوان اساس مطالعات در زمینه کشت بافت قرار گرفت. اساس تئوری کشت بافت گیاهی توسط هابرلنت فیزیولژیست شهیر آلمانی در سال ۱۹۰۲ پیشنهاد گردید.وی اظهار داشت طبق مطالعاتی که اینجانب انجام داده ام، مطالعه سیستماتیک سازمان یافته ای روی کشتسلولهای رویشی ایزوله شده گیاهان عالی انجام نشده است. او بر روی سلولهای ایزوله فتوسنتزی برگ وسلولهای متفاوت دیگر آزمایش کرد که ناموفق بود. با این وجود اظهار داشت که می توان به طور موفق جنین های مصنوعی حاصل از سلولهای رویشی را کشت کرد. بنابراین او به طور واضح نظریه توتی پتانسیرا بیان نمود و نشان داد که تکنیک کشت سلولهای ایزوله گیاهی در محلول غذایی، روش آزمایشی جدیدیبرای بررسی مسائل مهم است. براساس تحقیقات او در سال ۱۹۰۲ و بعد از آن، هابرلنت به عنوان پدرکشت بافت گیاهی نام گرفت.۷

اسلاید ۱۰: تاریخچهپس از آن در سال ۱۹۰۷ اولین کشت سلولهای حیوانی و انسانی انجام شد اما در کشت سلولهای گیاهی پیشرفتی وجود نداشت تا اینکه در سال ۱۹۵۵ هورمون کینتین کشف شد و به دنبال این کشف، کشت سلولها و بافتهای گیاهی رونق گرفت به طوری که در سال ۱۹۵۸ تعداد آزمایشگاههای کشت بافت گیاهی در آمریکا و کانادا به بیش از ۲۵۰ رسید که در هر آزمایشگاه سالانه بیش از یک میلیون گیاه تولید می گردد. این رقم در سال ۱۹۸۵ برای هر ۱۸ آزمایشگاه سالانه به ۶۰ میلیون گیاه رسید. پیشرفت مهم دیگری که در سال ۱۹۶۲ صورت گرفت معرفی و تولید محیط کشت MS (موراشیگ و اسکوگ) بود. این محیط یکی از بهترین محیط های کشتی است که امروزه نیز کاربرد دارد.۸

اسلاید ۱۱: تاریخچهسیر تکاملی پیشرفت کشت بافت:مرحله اول (۱۹۰۲-۱۸۹۲) هابرلند، ون وچینگ و رشینگر کشت بافت‏های گیاهان مختلف در محلول‎های نمکی ناپ و غنی از ساکارزهابرلند فرضیه‏ای در مورد خاصیت توتی‎پوتنسی هر سلول گیاهی زندهقابلیت سلول‎های‏ گیاهی به واقعیت بخشیدن پتانسیل نمو خود جهت تشکیل یک گیاه کامل در شرایط خاص کشت بود پدر علم کشت بافت گیاهی۹

اسلاید ۱۲: تاریخچهمرحله دوم (۱۹۲۲-۱۹۰۲)تهیه محیط کشت‏های اولیه جهت کشت بافت‏های حیوانی با منشاء طبیعی داشتند و حاوی پلاسمای خون و مایع جنینیمرحله سوم (۱۹۳۲-۱۹۲۲)رابینز دانشمند آمریکایی و کوته دانشمند آلمانی امکان کشت مریستم‏های انتهایی نوک ریشه گوجه فرنگی و ذرت بر روی محیط کشت‏های جامدمرحله چهارم (۱۹۴۰-۱۹۳۲)گاتریت، دانشمند فرانسوی امکان کشت موفق و مداوم بافت‏های گیاهی هویج را در شرایط درون شیشه‏ای با انتقال متناوب آنها بر روی محیط کشت‏های تازه۱۰

اسلاید ۱۳: تاریخچهوایت بر روی توتون نابکرت اولین کشت بافت‏های واقعی و طولانی مدت از بافت‏های تمایز یافته هویجمرحله پنجم (۱۹۶۰-۱۹۴۰)کشف کلاس جدیدی از هورمون‏های گیاهی به نام سیتوکینین‏ها و به‎خصوص هورمون کینتین در سال۱۹۵۵ امکان تحریک تقسیم سلول‏های برش یافته بافت پارانشیم میانی توتونمرحله ششم (۱۹۷۵-۱۹۶۰) کوکینگ روش‎های آنزیمی جهت تهیه پروتوپلاست‏های منفرد حاصل از ریشه و میوه گوجه فرنگی و کشت آنها در شرایط کنترل شده۱۱

اسلاید ۱۴: تاریخچهپاور و همکاران امتزاج مصنوعی پروتوپلاست‏ها باعث گشوده‏شدن راه جدیدی در ایجاد هیبریدهای سوماتیکیمورل دانشمند فرانسوی استفاده از ریزازدیادی گیاهان در شرایط درون شیشه‏ای با استفاده از کشت مریستم جهت تهیه مواد گیاهی عاری از بیماری در گیاه ارکیدهمرحله هفتم (۱۹۷۵ تا کنون)توسعه فناوری‏های درون شیشه‏ای تهیه انواع مواد بیولوژیکی مورد نیاز جهت انجام کارهای کشت بافت ۱۲

اسلاید ۱۵: خصوصیات آزمایشگاهخصوصیات آزمایشگاه کشت سلول و بافت:تعیین محل آزمایشگاه کشت بافت، تصمیم مهمی است. آزمایشگاه نباید در مجاورت آزمایشگاه هایی که ازمیکروارگانیسم ها و یا حشرات استفاده می کنند یا محل ذخیره بذر و مواد گیاهی هستند، تأسیس شود زیرا انتقال آلودگی از طریق دریچه هوا و رفت و آمد زیاد، مسئله ساز می گردد.رفت و آمد زیاد موجب بالارفتن غبار از کف زمین شده و به گسترش آلودگی کمک می کند. ازقراردادن گلدان حاوی گیاه در فضای آزمایشگاه کشت بافت اجتناب شود چون می توانند منبعی از کنه ها و سایرموجودات آلوده کننده دیگر باشد. بلافاصله بعد از پایان کار در مزرعه یا گلخانه، نباید وارد آزمایشگاه شد. زیرا احتمال ورود کنه و حشرات چسبیده به مو یا لباس به داخل آزمایشگاه وجود دارد.۱۳

اسلاید ۱۶: تجهیزات آزمایشگاهیتجهیزات و وسایل لازم برای یک آزمایشگاه کشت بافت به شرح زیر است:اتوکلاو، از این وسیله برای استیل کردن محیط های کشت و وسایل شیشه ای استفاده می شودطرح شماتیک از یک اتوکلاو۱۴

اسلاید ۱۷: تجهیزات آزمایشگاهی*دستگاه لامینار ایرفلو یا هود استریل ، مولدهوای استریل می باشد. هنگام کشت ، گیاه رازیر هود استریل کشت دهید.۱۵

اسلاید ۱۸: تجهیزات آزمایشگاهیمواد شیمیایی، منظور محیط های کشتی است که برای کشت استفاده می شود. محیط های کشت عموماً دارای عناصر ماکرو و میکرو، ویتامین، هورمون ، قند و آگار می باشد پس از تهیه محیط pH آن بین۵- ۷ دستگاه آب مقطرگیریآون )فور(، وسایل فلزی توسط این دستگاه استریل می گردد. ۱۶

اسلاید ۱۹: تجهیزات آزمایشگاهیاتاقک رشد یا Growth chamber در این اتاقکها از لامپهای آفتابی و مهتابی استفاده شده و دما طوری ،تنظیم می گردد که تا حدود ۲۵ درجه سانتیگراد باشد)با استفاده از تایمر می توان فتوپرید مناسب را برایهر گیاه را ایجاد نمود.)Hot Plate Magnet در تهیه محیط کشت از این دستگاه استفاده شود. p H متر۱۷

اسلاید ۲۰: تجهیزات آزمایشگاهیترازوی حامل، حساسیت آن باید از ۰/ – ۰۰۱ باشد تا موادی با مقادیر کم(مانند هورمونها) را نیز بتوان وزن کرد. شیکر ، در کشت مایع از آن استفاده می شود.مواد لازم برای استریل کردن جداکشت، محیط کشت و ابزار کار (شامل هیپوکلریت سدیم و الکل اتیلیک۷۰%)منبع گاز دستگاه لامیناریخچال و فریزر۱۸

اسلاید ۲۱: دستگاه لامینارایرفلو اتاقک استریل (دستگاه لامینارایرفلو)گرچه آماده سازی و قطع قلمه ها، قطعات کالوس و غیره، در یک ظرف شیشه ای و یا در بین فیلتر کاغذی استریل انجام می شود، ولی انجام این کار در اتاقک استریل ضرورت دارد. هنگامی که اعمال فوق در یک فضای غیراستریل انجام شود میزان آلودگی افزایش چشمگیری می یابد، حتی اگر از کاغذ استریل جهت کار استفاده شود. اتاقک استریل محلی است که هوای مکیده شده از خارج قبل از ورود به آن ، با عبور از فیلترهای بسیار ریز، تصفیه می شود. این سیستم تصفیه جریانی از هوای استریل ایجاد می نماید، همچنین به منظور ضدعفونی خشک از چراغ الکلی یا چراغ گازی استفاده می شود۱۹

اسلاید ۲۲: استریل کردنکلیاتی در مورد استریل کردن:استریل کردن شامل استریل مواد گیاهی ) جداکشت ها ( ، محیط کشت و ابزار مورد مصرف در کشت سلول و بافت می باشد. در مورد مواد گیاهی یا جداکشتها، ابتدا سطح اندامی که قرار است به عنوان جداکشت استفاده شود )مثل شاخ و برگ یا ریشه(…. را با مایع ظرفشویی شسته و به خوبی آب کشی کرده سپس جداکشت مورد نظر را تهیه و در محلول هیپوکلریت سدیم (وایتکس) قرار می دهیم. باتوجه به نوع گیاه و نوع جداکشت ، تیماری که برای استریل کردن استفاده می کنیم ، متفاوت است. به این معنی که رقت محلول هیپوکلریت سدیم و زمان قرار دادن جداکشت در آن بسته به نوع گیاه متفاوت است (باید توجه نمود تا نمونه تیره نشود.) لازم به توضیح است که جداکشت یا Explant. (به قطعه ای از گیاه که در محیط کشت قرار می گیرد گفته می شود) را می توان از تمام قسمتهای یک گیاه اعم از سیستم انتهای ساقه، برگ، ساقه، ریشه و … بدست آورد.از دیگر مواردی که نیاز به استریل کردن دارد، محیط های کشت می باشد. پس از تهیه محیط کشت دلخواهآن را در شیشه های درب دار (شیشه های سس مایونز شیشه های مناسبی است چرا که هزینه کمی هم دربر دارد) ریخته و در اتوکلاو استریل نمایید.توجه: درب شیشه های حاوی محیط کشت استریل تنها باید هنگام کار در زیر دستگاه لامینار (اتاقک استریل) باز شود.استریل کردن ابزار کار نیز از جمله مواردی است که باید رعایت گردد. ابزار فلزی مورد نیاز از جمله دسته تیغ یا قیچی و پنس را داخل فویل آلومینیوم پیچیده و در آون با حرارت ۲۰۰ درجه سانتیگراد به مدت یک ساعت استریل کنید. ظروف پتری را نیز می توان مشابه ابزار فلزی استریل نمود. هورمونها و برخی ویتامینها که به دمای بالا حساس هستند را بعد از استریل شدن محیط کشت و در زیر دستگاه لامینار با استفاده از فیلترهای غشایی به محیط کشت اضافه نمائید.۲۰

اسلاید ۲۳: تیمارگرمائی Heat Therapy، تیمارگرمائی تیمارگرما برای خلاصی از عوامل آلودگی در گیاه استفاده می شود. یکی از مهمترین عوامل آلودگی، ویروسها می باشند. گیاهان و ویروسها واکنش یکسانی به تیمارگرمایی نشان نمی دهند اما باید تعادلی به وجود آید که هم به گیاه اجازه رشد داده شود و هم بیشترین میزان حذف ویروس را داشته باشیم . همانطور که می دانیم در شرایط رشد طبیعی به موازات رشد انتهایی ساقه، ویروس نیز به بافتهای جدید منتقل می شود. اگر گیاه بتواند در درجه حرارتهای بالا رشد کند، در این صورت احتمال کاهش سرعت همانند سازی ویروس وجود دارد و در نتیجه انتهای ساقه می تواند سریع تر از ویروس رشد کرده و عاری از ویروس گردد. سپس می توان انتهای ساقه را که عاری از ویروس است، قطع و آن را کشت نمود. دمایی که معمولا استفاده می شود ۳۶ تا ۳۷ درجه برای چند روز (تا ۷ روز( در ماه است. استفاده از برخی مواد شیمیایی در محیط کشت نظیر. Ribavirin نیز منجر به تولید گیاه عاری از ویروس می گردد ۲۱

اسلاید ۲۴: محیط کشت و ترکیبات آنانتخاب محیط کشت برای موفقیت در کشت بافت ضروری است . هیچ محیط کشت مشخصی را نمی توان برای رشد انواع سلولها توصیه کرد و اغلب لازم است تغییراتی در محیط کشت برای پاسخگویی انواع مختلف جداکشت صورت گیرد. مسیر تعیین یک محیط کشت به هدف کشت سلول و بافت بستگی دارد. به طور کلی محیط کشت حاوی نمک های غیر آلی و ترکیبات آلی مثل تنظیم کننده های رشد، ویتامینها کربوهیدراتها و یک عامل ژله ای کننده محیط می باشد، علاوه بر این محیط کشت می تواند دارای اسید آمینه و آنتی بیوتیک نیز باشد.۲۲

اسلاید ۲۵: محیط کشت و ترکیبات آن اجزای محیط کشت بافتهای گیاهی به شرح زیر است:الف) نمک های غیرآلی و مواد معدنی*برای رشد بافتهای گیاهی کشت شده ، تأمین مداوم بعضی از ترکیبات شیمیایی معدنی در محیط کشت ضروری می باشد. کربن، هیدروژن، اکسیژن، فسفر، پتاسیم، کلسیم، منیزیم و نیتروژن به مقادیر نسبتاً زیادی برای رشد و نمو بافتهای گیاهی ضروری می باشد.*نیتروژن که بیشتر از سایر عناصر مورد استفاده می باشد به صورت نیترات یا یون آمونیاک و یا ترکیبی از آنها به محلول غذایی افزوده می شود. سولفات منیزیم نیاز محیط کشت به دو عنصر منیزیم و گوگرد را تأمین می کند فسفر را می توان به صورت فسفات منوسدیک و یا فسفات منو پتاسیک به محیط کشت اضافه کرد. به منظور تأمین کلسیم می توان از کلرور کلسیم یا نیترات کلسیم استفاده نمود.۲۳

اسلاید ۲۶: محیط کشت و ترکیبات آن( MS) 3 ترکیب محلول های ذخیره پنج نمک غیرآلی فرمولاسیون موراشیگ و اسکوگ – جدول ۱ماده شیمیاییغلظت(گرم در لیتر محلول ذخیره)ماده شیمیاییغلظت(گرم در لیتر محلول ذخیره)محلول ذخیره نیترات KI0/083NHNO165CoCI.6HO0/0025KNO190PBMO محلول ذخیره KHPO 17محلول ذخیره سولفات HBO0/62MgSO.7HO37NaMoO.2HO0/025MnSO.HO1/69NaFeEDTA محلول ذخیره ZnSO.7HO0/86FeSO.7HO2/784CuSO4.5HO0/0025NaEDTA3/724محلول ذخیره ھالوژنھا(ھالیدھا) CaCI.2HO44 درجدول۱-۲ ۳ محلولهای ذخیره پنج نمک غیرآلی MS نشان داده شده است. این محلولهای ذخیره با غلظت ۱۰۰ برابر غلظت نهایی محیط کشت تهیه می شوند. از ۱۰ میلی لیتر محلول ذخیره برای تهیه ۱۰۰۰ میلی لیتر محیط کشت استفاده می گردد.۲۴

اسلاید ۲۷: محیط کشت و ترکیبات آناز فرمولاسیون موراشیگ و اسکوگ(MS) به طور گسترده ای استفاده می شود و هدف از تهیه این محیط کشت )که به مقدار نمک های آن توجه خاصی شده است(آن است که نشان دهیم اضافه نمودن عصاره بافت های گیاهی (که قبلاً به محیط کشت اضافه می شد)؛ رشد سلولی در کشت درون شیشه را افزایش نمی دهد و مواد غذایی غیر آلی معادل، محدود کننده رشد سلولی نیستند. ب)تنظیم کننده های رشدتنظیم کننده های رشد ( یا هورمونها) ترکیبات آلی هستند که به طور طبیعی در گیاهان عالی ساخته میشوند و بر روی رشد و نمو اثر می گذارند. در کشت درون شیشه گیاهان عالی، نقش تنظیم کننده های رشد ( و از همه مهمتر اکسین ها و سیتوکسین ها) بارز می باشد و در اغلب موارد کشت درون شیشه بدون حضور تنظیم کننده های رشد غیر ممکن است . باید دانست اضافه کردن هورمون به محیط کشت بستگی به نوع قلمه و گونه گیاهی دارد . به عنوان مثال قلمه هایی که خود اکسین کافی تولید می کنند، به اکسین اضافی برای رشد و تقسیم سلولی نیاز ندارند.۲۵

اسلاید ۲۸: محیط کشت و ترکیبات آن اکسین ها:این هورمون باعث رشد طولی سلول ، تقسیم سلولی ، تشکیل ریشه های نابجا و ممانعت از تشکیل شاخه های نابجا و جانبی می گردد. در غلظت های پایین اکسین، تشکیل ریشه های نابجا تحریک شده در حالیکه در غلظت های بالاتر کالوس زایی تحریک می گردد. از مهمترین اکسینهائی که به میزان زیادی در کشت بافت استفاده می شود ایندول بوتیریک اسید (IBA) می باشد. این اکسین در محیط کشت به موقع تجزیه می شود (اکسین ها باید حداکثر پس از ۵ روز در محیط کشت تجزیه شوند) از دیگر اکسین های رایج میتوان از ایندول استیک اسید یا IAA (زودتر از حد معمول در محیط تجزیه می شود)، نفتالین استیک اسید یاNAA (دیرتر از حد معمول در محیط کشت تجزیه می گردد) و ۲ و ۴ دی کلروفنوکسی استیک اسید(D- 4 و۲ ) برای القای کالزایی و از NAA وIBA ،IAA برای ریشه زایی استفاده می گردد. سیتوکنین ها:کینتین، بنزیل آدنین (BA) زآتین- ۲ ایزوپنتیل آدنین ( ۲ ip) از پر مصرف ترین سیتوکینین هایی هستند که در محیط های کشت گیاهی به کار می روند. این هورمونها غالباً برای تحریک رشد و نمو به کار می روند.سیتوکینین ها در غلظت کم (۱/۰میلی گرم در لیتر) باعث تولید کالوس و در غلظتهای بیشتر(۱۰-۱میلی گرم در لیتر)شاخه زایی را تحریک می نمایند.۲۶

اسلاید ۲۹: محیط کشت و ترکیبات آناسید جیبرلیک: این گروه شامل حدود ۶۰ ترکیب است که GA3 رایج ترین آنها در گیاهان است. اسید جیبرلیک به ندرت در کشت بافت استفاده می شود. نقش اسید جیبرلیک عموماً در تحریک جوانه زنی بذر و تحریک رشد طولی میانگره هاست . به طور کلی اثر این هورمون در محیط های کشت ، تحریک طویل شدن شاخساره های خیلی کوچک و تحریک تشکیل جنین روی کالوس می باشد اسید آبسیزیکABA: این تنظیم کننده یکی از مهارکننده های رشد محسوب شده اما در کشت بافت در تحریک نمو جنین از کالوس نقش دارد و از آن به ندرت در جنین زایی سوماتیک استفاده می شود. اتیلن: از این هورمون در کشتهای invitro جهت جوانه زدن و تمایز سلولهای چوبی استفاده می شود.۲۷