پاورپوینت کامل کاربرد اسپکتروفتومتری در بیو شیمی ۱۳۱ اسلاید در PowerPoint

توجه : این فایل به صورت فایل power point (پاور پوینت) ارائه میگردد

 پاورپوینت کامل کاربرد اسپکتروفتومتری در بیو شیمی ۱۳۱ اسلاید در PowerPoint دارای ۱۳۱ اسلاید می باشد و دارای تنظیمات کامل در PowerPoint می باشد و آماده ارائه یا چاپ است

شما با استفاده ازاین پاورپوینت میتوانید یک ارائه بسیارعالی و با شکوهی داشته باشید و همه حاضرین با اشتیاق به مطالب شما گوش خواهند داد.

لطفا نگران مطالب داخل پاورپوینت نباشید، مطالب داخل اسلاید ها بسیار ساده و قابل درک برای شما می باشد، ما عالی بودن این فایل رو تضمین می کنیم.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل می باشد و در فایل اصلی پاورپوینت کامل کاربرد اسپکتروفتومتری در بیو شیمی ۱۳۱ اسلاید در PowerPoint،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از مطالب داخلی اسلاید ها

پاورپوینت کامل کاربرد اسپکتروفتومتری در بیو شیمی ۱۳۱ اسلاید در PowerPoint

اسلاید ۴: بطور کلی هر اسپکتروفتومتر: یک منبع نورانی، یک وسیله ایجاد نور تکرنگ با طول موج مشخص یک سلول یا لوله مخصوص برای جادادن محلول رنگی، یک سلول فتوالکتریک و یک گالوانومتر دارد.

اسلاید ۵: اندازه گیری غلظت یک محلولبه دو روش می توان غلظت یک محلول را اندازه گیری کرد:الف) از راه اندازه گیری نوری که از محلول رنگی خارج می شود وبه آن ،Transmitance ،یا عبور می گویند؛ب) اندازه گیری مقدار نوری که جذب محلول رنگی می شود و به آن دانسیته اپتیک (OPTICAL DENSITY) O.D یا آبسوربنس می گویند.

اسلاید ۶: الف) دانسیته اپتیک یا آبسوربنسنوری که از یک محلول رنگی عبور می کند مقداری از آن جذب محلول رنگی می شود .اگر Io شدت نور اولیه و I شدت نور خارج شده از محلول باشد بنابراین I a شدت نوری است که جذب محلول رنگی گردیده است.Ia = I – IoLog Io – log I =OD = Absorbanc logI/I0=OD (1) log I0/I=OD

اسلاید ۷: جذب از دو قانون پیروی می کند:مطابق قانون بیرولامبرت (BEER & LAMBERT) هنگامیکه نور یک رنگ از محلول رنگی عبور میکند مقدار نوری که به وسیله محلول جذب می شود ویا مقدار نوری که از محلول خارج می شود؛ به غلظت ماده رنگی موجود در محلول به ضخامت لوله ایکه نور از آن عبور کرده بستگی دارد گردد.یعنی: OD=KCL = جذ ب

اسلاید ۸: قانون بیر لامبرتlogIo/I= KCL که در آن K ضریب جذب ماده مورد آزمایش، C غلظت جسم مورد آزمایش و L قطر لوله می باشد و چون معمولاً قطر لوله را مساوی یک سانتی متر اختیار میکنند بنابراین خواهیم داشت: OD= log I0/I=KC K یا ضریب جذب ماده برای مواد مختلف فرق می کند و به آسانی قابل اندازه گیری است.

اسلاید ۹: میزان عبور یا ترا نسمیتا نسب) ترانسمیتانس ) عبور) : مقدار نوری است که از محلول رنگی مورد آزمایش خارج می شود، اگر شدت نور اولی I0 و نور خارج شده I باشد: I0-I=Ia I/I0=T Log I0/I=Log1/T OD=Log1/T

اسلاید ۱۰: مثال در مورد جذب وعبوراگر نور وارد شده در محلول ۱۰۰ و نور خارج شده از آن ۱۰ درصد نور اولیه باشد خواهیم داشت:OD= log 100 –log 10 OD= 2-1 OD =1

اسلاید ۱۱: نحوه درجه بندی دستگاه اسپکتروفوتومترروی صفحه مدرج دستگاه در قسمت بالا درصد نور عبور کرده یا ترانسمیتانسدر قسمت پائین درست در مقابل درجات ترانسمیتانس OD،یا ابز ربنس قرار می هند.، درجات میزان عبور همه با هم مساوی است. درجات O D به علت لگاریتمی بودن نامساوی هستند.

اسلاید ۱۲: روش کار و اندازه گیری جذب یک محلولآزمایش ۱ – بهترین طول موج برای اندازه گیری غلظت یک محلول رنگی چیست؟می دانید که از تجزیه نور سفید نورهای مختلف رنگی حاصل می شود که در قسمت مرئی دارای طول موجهای زیر می باشد. بنفش ۴۲۰-۴۳۰، آبی۴۷۰-۴۹۰، سبز۵۲۰-۵۵۰ ، زرد۵۸۰

اسلاید ۱۳: انتخاب طول موج مناسب جهت اندازه گیری جذبمحلول مورد آزمایش رادرمعرض تابش نورهایی با طول موجهای مختلف قرارداده OD های قرائت شده را یادداشت می کنیم. نمودار جذب برحسب طول موج را رسم می کنیم.طول موج منا سب ،طول موجی است که ماکز یمم جذب را دارد.

اسلاید ۱۴: روش انجام آزمایشآزمایش ۲ – جهت رسم منحنی دانسیته اپتیک بر حسب غلظت های مختلف:۶ لوله آزمایش انتخاب کرده آن ها را از ۱ تا ۶ شماره گذاری کنید به ترتیب در آنها ۰ ؛۱، ۲، ۴، ۶ و ۸ میلی لیتر محلول بروموفنل( mg/L10 ) بریزید.سپس به ترتیب ۱۰ ، ۹ ،۸ ، ۶ ،۴ و۲ میلی لیتر آب مقطر بریزید.

اسلاید ۱۵: صفر دستگاه را با لوله شماره ۱ میزان کنید.مقدار دانسیته اپتیک لوله های بعدی را در ۵۸۰ میلی میکرون اندازه بگیرید منحنی تغییرات دانسیته اپتیک بر حسب غلظت محلول رسم نمائید. در صورتیکه منحنی از قانون بیر متابعت کند به صورت یک خط مستقیم خواهد بود.

اسلاید ۱۶: دو نکته: عملی۱ – در قرائت OD نتایج، زمانی قابل اطمینان است که: ۰.۷ < OD <0.1بنابر این غلظت مجهول اگر زیاد باشد باید آنرا با حلال مربوطه طوری رقیق نمود که OD آن در حدود بیان شده قرار گیرد.در این صورت ضریب رقت را باید در محاسبه منظور نمود.۲ – اگر قرائت OD چندین مجهول پشت سر هم بخواهد انجام گیرد در فواصل قرائت باید دستگاه را با شاهد (BLANK) روی صفر OD تنظیم نمود.

اسلاید ۱۷: روشهای جدا کردن مواد از یکدیگردیالیز ، با استفاده از کیسه های سلوفان.ژل فیلتراسیون “GEL FILTRATION”..کروماتوگرافی های مختلف (لایه نازک – جذبی – تعویض یونی – کاغذی)الکتروفورز

اسلاید ۱۸: آزمایش قندها یا گلوسیدها قندها یا ساکاریدها را به سه دسته تقسیم می کنند:دسته اول – منوساکاریدهاپلی الکلهای ۳ تا ۷ کربنی هستند که یکی از عاملهای الکلی به عامل کربنیل تبدیل شده است و به ترتیب آنها را تریوز – تتروز- پنتوز- هگزوز- هپتوز می نامند.منوساکاریدها ممکن است دارای عامل آلدئیدی یا ستنی باشند که در حالت اول آلدوز و در حالت دوم ستوز نامیده می شوند.مهمترین پنتوزها: آرابینوز – گزیلوز – ریبوز و…مهمترین هگزوزها: گلوکز-مانوز-گلاکتوز-فروکتوز … می باشند.

اسلاید ۱۹: دسته دوم – الیگوساکاریدهااز الیگو ساکاریدها، دی ساکاریدها دارای اهمیت بیشتری هستند. بعضی از دی ساکاریدها دارای خاصیت احیاکنندگی می باشند مانند: مالتوز و لاکتوز. برخی دیگر دارای خاصیت احیاء کنندگی نیستند. مانند ساکارز یا سوکروز.دسته سوم – پلی ساکاریدهامهمترین پلی ساکاریدها شامل نشاسته، سلولز و گلیکوژن می باشد.

اسلاید ۲۰: واکنش رنگی قندها مهمترین واکنش های رنگی قندها به قرار زیرند:۱ – واکنش مولیش (Molisch) : – نفتل + اسید سولفوریک غلیظ ؛ این واکنش برای تمام ساکاریدها مثبت است.۲ – واکنش بارفود (Barfoed) : استات مس در اسید استیک ۱%؛این واکنش مخصوص منوساکاریدهاست.۳ – واکنش بیال (Bial)اورسینول در اسید کلریدریک + FeCl3 ؛ به پنتوزها مانند گزیلوز جواب مثبت می دهد.

اسلاید ۲۱: –۴ واکنش سلیوانف (Selivanoff) : رزورسینول در HCl ؛ این واکنش مخصوص ستوهگزوزها مانند فروکتوز می باشد آلدوهگزوزها بکندی واکنش می کنند.۵ – واکنش بندیکت (Benedict) : محلول قلیائی سیترات مس ؛ این واکنش به تمام قندهای احیاء کننده جواب مثبت میدهد مانند منوساکاریدها (گلوکز –فروکتوز) و دی ساکاریدهای احیا کننده نظیر لاکتوز و مالتوز محلول فهلینگ (Fehling) نیز نظیر بندیکت واکنش می دهد.

اسلاید ۲۲: ۶– واکنش ید (Iodine test) : محلول ید با نشاسته و گلیگوژن ایجاد رنگ می نماید. در حالیکه با سلولز و دکسترین و اینولین رنگی نمی دهد.۷

اسلاید ۲۳: –۷ واکنش تشکیل اوزازون (Osazone formation منو و دی ساکاریدهای احیاء کننده با محلول فنیل هیدرازین قلیایی تولید بلوریهای مشخص می نمایند. اوزازون گلوکز – فروکتوز و مانوز شبیه یکدیگرند . بعضی از اوزازون ها مانند لاکتوزازون در گرما محلولند.

اسلاید ۲۴: واکنشهای اختصاصی قندها ۱ – واکنش مولیشاین واکنش به تمام قندها جواب مثبت می دهد. قندها در مجارت اسیدهای غلیظ آب از دست داده و تبدیل به فورفورال یا مشتقات آن می شوند؛این جسم با محلول الکلی آلفا- نفتل ماده رنگی ایجاد می کند. خلاصه واکنش ها به قرار زیر است:

اسلاید ۲۵: ۲ – واکنش بارفود (Barfoed)این واکنش وجود منوساکاریدها را مشخص می نماید. به ۴ میلی لیتر معرف بارفود یک میلی لیتر از قند مورد آزمایش اضافه می کنیم. لوله آزمایش را به مدت ۳ تا ۵ دقیقه در آب جوش قرار می دهیم. در منوساکاریدها رسوب قرمز اکسید کوئیورو در ته لوله تشکیل می گردد.این آزمایش را با یک پنتوز (گزیلور)، گلوکز یا فروکتوز، لاکتوز انجام دهید.

اسلاید ۲۶: ۳-– واکنش مور (Moor)این واکنش به قندهای احیاء کننده جواب مثبت می دهد.، به ۵ میلی لیتر محلول قند ۱ میلی لیتر سود ۱۰% افزوده و آنرا در آب جوش قرار می دهیم. بعد از ۵ دقیقه ایجاد رنگ قهوه ای و بوی مشخص دلیل بر مثبت بودن واکنش است.محلول گلوکز، مالتوز، ساکارز، و نشاسته را آزمایش کنید.

اسلاید ۲۷: ۴ – واکنش بندیکت (Benedict)به قندهای احیاء کننده جواب مثبت می دهد. به ۵ میلی لیتر معرف بندیکت کیفی ۸ تا ۱۰ قطره از محلول مورد آزمایش اضافه کنید.برای ۵ دقیقه در آب جوش بگذا رید .پس از سرد شدن در صورتی که رسوب سبز، زرد یا قرمز ایجاد شود دلیل بر وجود قند احیاء کننده است. این آزمایش را بر روی گلوکز، فروکتوز، گزیلوز، ساکارز و مالتوز انجام دهید.

اسلاید ۲۸: -۵واکنش فهلینگ (Fehling) فهلینگ A محتوی سولفات مس است. فهلینگ B محتوی تارترات سدیم و پتاسیم و کمی هیدروکسید سدیم است.۱میلی لیتر فهلینگ A و ۱ میلی لیتر فهلینگ B را مخلوط می کنیم.۲ میلی لیتر از محلول مورد آزمایش روی آن ریخته و می جوشانیم. اگر محلول مورد آزمایش قند احیا کننده باشد رسوبی تولید می شود؛ که رنگ آن از زرد به قرمز متغییر است

اسلاید ۲۹: –۶ واکنش سلیوانوف (Selivanoff) این واکنش به ستوزهائی که دارای عامل ستنی هستند جواب مثبت می دهد.به ۵ میلی لیتر معرف سلیوانف ۵ قطره از محلول قند مورد آزمایش افزوده آنرا در حمام ماری جوشان برای ۹۰ ثانیه و یا روی شعله مستقیم برای ۴۵ ثانیه حرارت می دهیم . رنگ یا رسوب قرمز دلیل وجود ستوز است.اگررسوب را در الکل اتیلیک حل کنیم الکل به رنگ قرمز در می آید.

اسلاید ۳۰: واکنش سلیوانف بسیار حساس است. اگر قندهای دیگری با غلظت زیاد یعنی بیش از ۲% بدان اضافه شود همین رنگ را تولید می نماید. ساکارز اگر کمی بیشتر از زمان ذکر شده حرارت داده شود چون هیدرولیز می شود لذا به واکنش سلیوانف جواب مثبت می دهد. .فرمول احتمالی ترکیب قرمز رنگ در آزمایش سلیوانف :

اسلاید ۳۱: –۷ واکنش بیال (Bial) برای تشخیص پنتوزها از واکنش بیال و تائوبر استفاده می شود.بر روی ۵ میلی لیتر معرف بیال ۲ میلی لیتر از محلول مورد آزمایش اضافه می کنیم .به ملایمت حرارت می دهیم تا بجوشد سپس آنرا سرد می کنیم. رنگ آبی تا سبز وجود پنتوز را مشخص می کند.

اسلاید ۳۲: -۸واکنش تشکیل اوزازن این واکنش مخصوص تمام منوو دی ساکاریدهای احیاء کننده است.درهر یک از چهار لوله ۲ میلی لیتر از معرف فنیل هیدرازین. و سپس بترتیب ۲ میلی لیتر از قندهای آرابینوز، گلوکز، لاکتوز و مالتوز.لوله ها را برای مدت ۱۵ تا ۳۰ دقیقه در آب جوش قرار می دهیم. سپس در حرارت آزمایشگاه خنک می کنیم . با یک پیپت یک قطره از رسوب را روی لام گذارده و با لامل آنرا می پوشانیم. در زیر میکروسکوپ بلورهای آنها را مشاهده می‌کنیم.

اسلاید ۳۳: زمان تشکیل اوزازن برای قندهای مختلف به شرح زیر است:فروکتوز۲ دقیقهگلوکز ۱۵-۱۹ دقیقهلاکتوز پس از سرد شدن کاملاً سرد می کند.مالتوزپس از سرد شدن کاملاً رسوب می کند.ساکارزدر مدت آزمایش رسوبی ایجاد نمی کند بلورهای اوزازان از بالا و به ترتیب عبارتند از:گلوکزازن گالاکتوزانآرابینوزازنلاکتوزازنمالتوزازنگزیلوزازن

اسلاید ۳۴: –۹ هیدرولیز ساکارز در ۳ میلی لیتر از محلول ساکارز یک تکه کاغذ قرمز کنگو ابیاندازید. قطره قطره اسید کلریدریک ۱% بیافزائید تا کاغذ به رنگ آبی درآید (PH در حدود ۳-۲). مخلوط را برای مدت ۵ دقیقه بجوشانید.روی محلول هیدرولیز شده واکنشهای بندیکت – بارفود – سلیوانف را انجام داده و نتیجه را شرح دهید.

اسلاید ۳۵: -۱۰واکنش ید این واکنش مخصوص پلی ساکاریدهایی نظیر نشاسته و گلیکوژن است. به چند میلی لیتر از چسب نشاسته یک قطره محلول ید – یدوره اضافه می کنیم رنگ آبی بنفش تولید می شود.اگر مخلوط را بجوشانیم بیرنگ شده و پس از سرد کردن رنگ آبی دوباره ظاهر می شود. ید با گلیکوژن رنگ قهوه ای تولید مینماید.

اسلاید ۳۶: تعیین مقدار گلوکز یا سایر قندهای احیاکننده به وسیله معرف بندیکت کمی تئوری محلول بندیکت کمی شامل مواد زیر است؛ سولفات مس، کربنات سدیم، سیترات سدیم، تیوسیانات‌ پتاسیم و فروسیانور پتاسیم. مس دو در محیط قلیایی و در مجاورت قندهای احیا کننده به مس یک ظرفیتی (Cu2O) تبدیل می شود.

اسلاید ۳۷: برای تشخیص یک قند مجهول از جدول زیر استفاده میکنیم.

اسلاید ۳۸: تعیین تیتر محلول بندیکت در یک ارلن مایر صد میلی لیتری ۲۰ میلی لیتر بندیکت کمی می ریزیم.۳ تا ۵ گرم کربنات سدیم و کمی خرده شیشه بر روی آن می افزاییم،. آن را در روی شعله به ملایمت می جوشانیم.از بورت گلوکز ۲ گرم در لیتر قطره قطره در حال جوش اضافه می کنیم تا رنگ آبی محلول از بین برود.تیتر محلول بندیکت از رابطه زیر بدست می آید:t.N T= N

اسلاید ۳۹: تیترT, ,عبارت است از:مقدارگرم قند احیا کننده ای که بتواند یک لیتر محلول بندیکت را احیا نماید. دررابطه ؛ T= t.n/Nt غلظت گلوکز (۲ گرم در هزار) n میلی لیتر گلوکز مصف شدN میلی لیتر بندیکت (ml 20) است.

اسلاید ۴۰: تعیین مقدار قند احیا کننده قنداحیاء کننده مورد آزمایش را در بورت ریخته. عملیات را عیناً مانند آزمایش قبل (تیتراسیون بندیکت) انجام می دهیم . غلظت قند را بر حسب گرم در لیتر از تساوی زیر بدت می آوریم:T.N X= n T تیتر بندیکت و N حجم بندیکت مورد مصرف (ml 20) و n لیتر محلول قند مصرف شده است.

اسلاید ۴۱: تبصره : می توان اندازه گیری غلظت گلوکز را با محلول فهلینگ در مجاورت فروسیانور پتاسیم نیز انجام داد ولی محلول بندیکت به علت خواص زیر بر محلول فهلینگ رجحان دارد:۱ – خاصیت قلیایی محلول بندیکت از محلول فهلینگ کمتر است لذا باعث پلیمریزاسیون شدن قندها نمی شود.۲ – محلولهای احیاء کننده ضعیف مانند اسید اوریک بر محلول بر محلول بندیکت اثر نداشته در صورتیکه محلول فهلینگ را احیاء می نماید.بنابر این سنجش گلوکز در مجاورت احیا کننده های ضعیف دیگر (مانند ترکیب ادرار) به کمک بندیکت به سهولت انجام پذیر است.

اسلاید ۴۲: گلوکزاوری گلوکز اوری glucosuria یعنی وجود گلوکز در ادرار . گلیکوز اوری glycosuria یعنی وجود هر نوع قندی . جواب مثبت کاذب ممک