فایل ورد کامل تشخیص شکار با استفاده از qPCR: اثر میزان شکار، زمان سپری شده، رژیم غذایی دنبال کننده و حفظ نمونه در مقدار قابل تشخیص از DNA شکار

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

این مقاله، ترجمه شده یک مقاله مرجع و معتبر انگلیسی می باشد که به صورت بسیار عالی توسط متخصصین این رشته ترجمه شده است و به صورت فایل ورد (microsoft word) ارائه می گردد

متن داخلی مقاله بسیار عالی، پر محتوا و قابل درک می باشد و شما از استفاده ی آن بسیار لذت خواهید برد. ما عالی بودن این مقاله را تضمین می کنیم

فایل ورد این مقاله بسیار خوب تایپ شده و قابل کپی و ویرایش می باشد و تنظیمات آن نیز به صورت عالی انجام شده است؛ به همراه فایل ورد این مقاله یک فایل پاور پوینت نیز به شما ارئه خواهد شد که دارای یک قالب بسیار زیبا و تنظیمات نمایشی متعدد می باشد

توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل تشخیص شکار با استفاده از qPCR: اثر میزان شکار، زمان سپری شده، رژیم غذایی دنبال کننده و حفظ نمونه در مقدار قابل تشخیص از DNA شکار،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

تعداد صفحات این فایل: ۲۵ صفحه

چکیده

با استفاده از PCR کمی تکثیرکننده ی یک امپلیکون ۲۱۴ جفت بازی mtDNA اختصاصی شکار از ژن میتوکندریایی COi سوسک کلرادو، Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae)، به منظور واضح کردن اثرات زمان و رژیم غذایی مصرف شده، تعداد تخم های شکار و روش-های تثبیت و حفظ نمونه بر مقدار DNA هدف شناسایی شده، از تخم های شکار با سن و تعداد مشخص برای تغذیه یک شکارگر عمومی Coleomegilla maculata (De Geer) (Coleoptera: Coccinellidae) استفاده شد. سیگنال، به طور مستقیم پس از قطع تغذیه به شدت ضعیف شد، حتی زمانی که شکارگرها بلافاصله در دمای ۲۰- درجه سلسیوس منجمد شده بودند. با این حال، مقدار هدف ردیابی شده، ارتباط معنی داری با تعداد تخم های مصرف کرده و زمان سپری شده از تغذیه دارد. کاهش DNA ردیابی شده ی شکار، با یک مدل نمایی منفی سازگار بود. توالی DNA هدف از شکارگرهای گرسنگی دیده ناپدید شد (نیمه عمر کمی برآورد شده ۵۹ دقیقه) که خیلی آهسته تر از آن هایی بود که از شته های سیب زمینی، پس از تغذیه از تخم های شکار مورد نظر تغذیه کرده بودند (برآورد نیمه عمر ۱۶ دقیقه)، در حالی که در آن هایی که از تخم های C. maculate به عنوان یک chaser استفاده کرده بودند، نرخ تخریب توالی DNA شکار مورد نظر در حد متوسط بود.

بحث
تضعیف سیگنال DNA ردیابی شده توسط qPCR در حین مصرف سریع، قابل توجه و متغیر بود، اما مقدار نهایی ردیابی شده، با مقدار شکار خورده شده مرتبط بود. این کاهش در DNA قابل ردیابی، طی چند دقیه تغذیه لارو شکارگر از تخم های ۱، ۳ و ۵ روزه ی L. decemlineata اتفاق افتاد. با استفاده از تکنیک اولیه حفاظت یعنی انجماد خشک در دمای ۲۰- درجه سلسیوس، دامنه ۰۰۱۲۸/۰- ۶۰/۴۳% از DNA هضم شده قابل ردیابی بود که نشان دهنده ی ۲۹/۲ تا ۷۸۱۲۵ برابری تضعیف سیگنال بود. تخریب سریع DNA هدف حتی قبل از t=0 پس از تغذیه نیز توسط Nejstgaard و همکاران (۲۰۰۸) در cope pod ها مشاهده شد، که در آن بازیابی qPCR جلبک تک سلولی مصرف شده در t=0، با کنترل های مثبت qPCR مقایسه شد (ارگانیسم شکار دست نخورده، مانند مطالعه ما) و همچنین از فلوروسانس کلروفیل و میکروسکوپی استفاده شد. مقدار بازیابی شده در t=0، به طور موافق کمتر از مقدار مورد انتظار بود، که تخمین ها از ۲ تا ۳۲ % با استفاده از خوانش فلورسانس و از ۱۱ تا ۲۰% در روش کلاسیک میکروسکوپی بود. Nejstgaard و همکاران (۲۰۰۸) سه منبع ممکن از این کاهش شدید در سیگنال را مورد بررسی قرار دادند: مهار توسط DNA شکارگر، منجمد کردن پس از تیمار، ذوب شدن و منجمد شدن (بخشی از پروتکل پس تغذیه ای آن ها)، هضم سریع توسط copepod ها. نتیجه گیری آن ها این بود که تداخل DNA شکارگر، حداقل در سبت کمتر از ۱۰۰۰۰: ۱ DNA شکارگر: شکار بی اهمیت بود. در سیستم ما، نسبت DNA شکارگر: شکار، کمتر از ۳۰: ۱ تخمین زده شد و این نگرانی که ممکن است بازدارندگی اتفاق بیفتد (Juen and Traugott 2006)، در مورد مطالعه ما قابل اغماض بود.

عنوان انگلیسی:Detection of predation using qPCR: Effect of prey quantity, elapsed time, chaser diet, and sample preservation on detectable quantity of prey DNA~~en~~

Abstract

Using quantitative PCR that amplified a prey-specific mtDNA 214 bp amplicon from the COI mitochondrial gene of the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae), prey eggs of known age and number were fed to larvae of the generalist predator lady beetle Coleomegilla maculata (De Geer) (Coleoptera: Coccinellidae), to elucidate the effects of time and diet since consumption, number of prey eggs, and methods for sample fixation and preservation, on the quantity of target DNA detected . Signal was strongly attenuated directly after cessation of feeding, even when predators were immediately frozen at 20°C. However, the quantity of target detected was significantly related to the number of eggs consumed and the time elapsed time since eating. Decrease in detected prey DNA was consistent with a negative exponential model. The target DNA sequence disappeared from starved predators (quantitative half-life estimate of 59 min) more slowly than those fed potato aphids after consuming the target prey eggs (half-life estimate 16 min), whereas those fed C. maculata eggs as a chaser were intermediate in the rate at which they degraded the target prey DNA sequence.

$$en!!