فایل ورد کامل بلاکینگ پرایمرها برای افزایش تکثیر توالی های نادر PCR در نمونه های مخلوط – مطالعه موردی در مورد دی ان ای شکار در معده کریل قطب جنوب

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

این مقاله، ترجمه شده یک مقاله مرجع و معتبر انگلیسی می باشد که به صورت بسیار عالی توسط متخصصین این رشته ترجمه شده است و به صورت فایل ورد (microsoft word) ارائه می گردد

متن داخلی مقاله بسیار عالی، پر محتوا و قابل درک می باشد و شما از استفاده ی آن بسیار لذت خواهید برد. ما عالی بودن این مقاله را تضمین می کنیم

فایل ورد این مقاله بسیار خوب تایپ شده و قابل کپی و ویرایش می باشد و تنظیمات آن نیز به صورت عالی انجام شده است؛ به همراه فایل ورد این مقاله یک فایل پاور پوینت نیز به شما ارئه خواهد شد که دارای یک قالب بسیار زیبا و تنظیمات نمایشی متعدد می باشد

توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل بلاکینگ پرایمرها برای افزایش تکثیر توالی های نادر PCR در نمونه های مخلوط – مطالعه موردی در مورد دی ان ای شکار در معده کریل قطب جنوب،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

تعداد صفحات این فایل: ۲۴ صفحه

بحث

این بررسی نشان می‌دهد که حذف کامل توالی شکارچی می‌تواند از طریق افزودن پرایمرهای ممانعت‌کننده‌ی ویژه‌ی آن به مخلوط PCR صورت بگیرد. گرچه تکنیک‌های پیچیده‌ی توالی‌یابی مانند pyrosequencing [46] و polony sequencing [47] امروزه امکانات جدیدی در ردیابی تنوع توالی در نمونه‌های مخلوط مهیا کرده‌اند [۴۸]، روشی برای حذف توالی‌ای که بیش از ۱۰۰۰برابر توالی‌های دیگر در نمونه حضور دارد، بسیار مفید خواهد‌بود. افزودن یک پرایمر ممانعت‌کننده‌ی ویژه‌ی توالی شکارچی نیز یک روش ساده برای تکثیر همه‌ی توالی‌های مربوط به جانوران شکار در نمونه‌ی معده جانور شکارچی می‌باشد. به‌علاوه، این روش نیازی به هیچ پیش‌آگاهی از جانوران شکار ندارد بلکه تنها توالی‌ای که باید از پیش دانسته‌شود، توالی مربوط به خود شکارچی است. در این بررسی همچنین ما نشان دادیم که یک پرایمر DPO [41] که سمت ۳′ آن مسدود شده نیز می‌تواند به عنوان پرایمر ممانعت‌کننده به کار رود. این امر ناحیه‌ای که می‌شود در آن به دنبال یک جایگاه اتصال پرایمر ممانعت‌کننده گشت را گسترش داده و بسیار مفید است به‌ویژه از آن رو که تلاش‌های اولیه برای استفاده از یک پرایمر مسدودکننده بین پرایمرهای رفت و برگشت کارآمد نبوده‌است.

عنوان انگلیسی:Blocking primers to enhance PCR amplification of rare sequences in mixed samples – a case study on prey DNA in Antarctic krill stomachs~~en~~

Discussion

This study shows that complete removal of predator sequences could be achieved by adding a predator specific blocking primer to a PCR mixture. Even though more sophisticated sequencing techniques such as pyrosequencing [46] and polony sequencing [47] now open new possibilities in assessing sequence diversity of mixed templates [48], applying a method that screens away templates assumed to occur in 1000-fold excess compared to what you are looking for will certainly be beneficial. Adding a predator specific blocking primer is also a simple method that allows for using a single PCR to simultaneously amplify DNA from all prey items present in each stomach sample. Furthermore, it does not depend on tests being developed a priori for potential prey, the only sequence that is needed to be known, is the sequence of the predator itself. In this study we also show that a DPO primer [41] having the 3′ end blocked also could be used as a blocking primer. This extends the region to look for species-specific blocking sites and is very useful especially since initial trials with a krill specific ‘elongation arrest’ primer located between the forward and reverse universal primer did not work.

$$en!!