فایل ورد کامل جهش های جایگزینی و حذف در دامنه کاتالیستی و منطقه کمربندی گلوکامیلاز آسپرژیلوس آواموری به منظور افزایش پایداری گرمایی

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

این مقاله، ترجمه شده یک مقاله مرجع و معتبر انگلیسی می باشد که به صورت بسیار عالی توسط متخصصین این رشته ترجمه شده است و به صورت فایل ورد (microsoft word) ارائه می گردد

متن داخلی مقاله بسیار عالی، پر محتوا و قابل درک می باشد و شما از استفاده ی آن بسیار لذت خواهید برد. ما عالی بودن این مقاله را تضمین می کنیم

فایل ورد این مقاله بسیار خوب تایپ شده و قابل کپی و ویرایش می باشد و تنظیمات آن نیز به صورت عالی انجام شده است؛ به همراه فایل ورد این مقاله یک فایل پاور پوینت نیز به شما ارئه خواهد شد که دارای یک قالب بسیار زیبا و تنظیمات نمایشی متعدد می باشد

توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل جهش های جایگزینی و حذف در دامنه کاتالیستی و منطقه کمربندی گلوکامیلاز آسپرژیلوس آواموری به منظور افزایش پایداری گرمایی،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

تعداد صفحات این فایل: ۱۷ صفحه

چکیده

سه جهش تک پس ماند  ، Asp71Asn, Gln409Pro و Gly447Ser ، دو جهش جایگزینی حلقه بلند به کوتاه به صورت Gly23-Ala24-Asp25-Gly26-Ala27-Trp28-Val29-Ser30Asn-Pro-Pro ( 23-30 جایگزینی) و Asp297-Ser298-Glu299-Ala300-Val301Ala-Gly-Ala ( 297 تا ۳۰۱ جایگزینی)  جهش های حذف کننده که باعث حذف شدن Glu439  ، Thr440 و Ser441 (439–۴۴۱)) می شود، همه مبتنی بر تراز بندی توالی های آمینو اسید هایی هستند که به منظور افزایش مقاومت و پایداری گرمایی گلوکامیلاز آسپرژیلوس آواموری شکل می گیرند.  دو جهش اول و دوم تک پسماندی به صورتی طراحی شده اند تا یک مکان بالقوه گلیکولیزه سازی N ایجاد شود و  چرخش پروتئین پشتوانه را محدود کند و ازین رو باعث شود که در طول باز شدن پروتئین ها، میزان انتروپی کاهش پیدا کند. سومین جهش تک پس ماند نیز به این هدف ایجاد می شود که انعطاف کاهش پیدا کرده و میزان گلیکوزیل سازی O در منطقه کمربندی گلیکوزیل شده O افزایش پیدا کند که این قسمت حول دامنه کاتالیزی کروی شکل توسعه پیدا می کند. جهش های ۳۰-۲۳ جایگزینی نیز به صورتی طراحی شده است که یک حلقه قابل توسعه بی ثبات از نظر گرمایی بر روی سطح دامنه کاتالیزی حذف شود و در نتیجه باقی مانده ی این بخش به بقیه ی دامنه کاتالیزی نزدیک تر می شود، در نتیجه مانع باز شدن پروتئین های این قسمت می شود. جهش جایگزینی ۳۰۱-۲۹۷ GA نیز به این منظور ایجاد شده است تا بتوان عملکرد منطقه پیچه ای بین آلفا هلیکس ۹ و ۱۰ مشخص شود. ۴۳۹–۴۴۱ نیز به منظور کاهش انعطاف این کمربند ایجاد شده است. تمام این شش جهش ها باعث افزایش پایداری دمایی گلوکومیلاز بدون تغییر محسوس ویژگی های جنبشی آنزیمی می شود و جهش ۳۰-۲۳ باعث افزایش فعال ساز انرژی آزاد برای غیر فعال سازی گرمایی با حدود ۴ kJ/mol می شود که منجر  به افزایش ۴ درجه سانتی گرادی در دمای عملیاتی در پایداری دمایی می شود.

عنوان انگلیسی:Replacement and deletion mutations in the catalytic domain and belt region of Aspergillus awamori glucoamylase to enhance thermostability~~en~~

Abstract

Three single-residue mutations, Asp71Asn, Gln409Pro and Gly447Ser, two long-to-short loop replacement mutations, Gly23-Ala24-Asp25-Gly26-Ala27-Trp28-Val29-Ser30Asn-Pro-Pro (23–۳۰ replacement) and Asp297-Ser298-Glu299-Ala300-Val301Ala-Gly-Ala (297–۳۰۱ replacement) and one deletion mutation removing Glu439, Thr440 and Ser441 (439–۴۴۱), all based on amino acid sequence alignments, were made to improve Aspergillus awamori glucoamylase thermostability. The first and second single-residue mutations were designed to introduce a potential N-glycosylation site and to restrict backbone bond rotation, respectively, and therefore to decrease entropy during protein unfolding. The third single-residue mutation was made to decrease flexibility and increase O-glycosylation in the already highly O-glycosylated belt region that extends around the globular catalytic domain. The 23–۳۰ replacement mutation was designed to eliminate a very thermolabile extended loop on the catalytic domain surface and to bring the remainder of this region closer to the rest of the catalytic domain, therefore preventing it from unfolding. The 297–۳۰۱ replacement mutant GA was made to understand the function of the random coil region between -helices 9 and 10. 439–۴۴۱ was constructed to decrease belt flexibility. All six mutations increased glucoamylase thermostability without significantly changing enzyme kinetic properties, with the 23–۳۰ replacement mutation increasing the activation free energy for thermoinactivation by about 4 kJ/mol, which leads to a 4°C increase in operating temperature at constant thermostability.

$$en!!